His标签蛋白纯化试剂盒：快速、高效、高特异性

Propure™ His-Tag-Ni-NTA树脂能承受一定浓度的还原剂、变性剂或偶联剂等恶劣条件，能简单、快速、高效、高特异性地纯化His-Tag-蛋白。Propure™ His Tag-Ni-NTA树脂能够有效地从可溶性蛋白质提取物中纯化聚组氨酸标记的蛋白质。该树脂由固定在4%交联琼脂糖上的带镍的次氮基三乙酸（NTA）螯合物组成。Ni NTA树脂通常被选择用于His标记的蛋白质纯化，因为螯合物上有四个金属结合位点，这允许高结合能力和低金属离子浸出

艾美捷His标签蛋白纯化试剂盒：

Cat #: D-AKTP201

Size: 1 mL/1 mL*5

Storage: Stable for 12 months at 4°C

His标签蛋白纯化试剂盒样品制备：

A从细菌或酵母中提取蛋白质

1.诱导蛋白质表达后，将细菌或酵母培养基转移到离心管中，在

7000转/分以收集细菌或酵母。

2.与10倍体积的裂解缓冲液（收集的细菌或酵母：裂解缓冲液=1:10）混合，加入最终浓度为1mM的PMSF。建议添加最终浓度为0.2-0.4mg/mL的溶菌酶。

3.对细胞进行复苏。如果细胞浓度较高，则添加10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I。将悬浮液混合并在冰中浸泡，保持裂解液清洁。

4.将干净的裂解物转移到新的离心管中，以10000rpm，4C离心20-30分钟。取上清液，在-20℃的冰上储存。

B从酵母、昆虫或哺乳动物细胞中提取的可溶性蛋白质

1.将细胞培养基转移到离心管中，以5000rpm离心10分钟以收集悬浮液。如果悬浮液中含有EDTA、组氨酸和其他还原剂，则应使用赖氨酸缓冲液对悬浮液进行透析。

2.大体积悬浮液应采用硫酸铵分级沉淀法浓缩，然后用赖氨酸缓冲液透析。

C用于在变性条件下纯化的包涵体蛋白质提取

1.将培养基转移到离心管中，以7000rpm离心15分钟以收集沉淀。拆下悬架。

2.与10倍体积的赖氨酸缓冲液混合，如收集的沉淀：赖氨酸缓冲剂=1:10（W/N）。裂解缓冲液不含8M尿素。恢复降水。将悬浮液在冰中混合并超声处理。

3.将裂解物转移到新的离心管中，在10000rpm、4℃下离心20-30分钟。处理上清液，再次重复步骤2和3。

4.与10倍体积的赖氨酸缓冲液混合，如收集的沉淀：赖氨酸缓冲剂=1:10（W/N）。在变性条件下，重新悬浮培养液进行纯化。

通常，在需要用金属离子重新充电之前，Ni NTA树脂可以至少使用五次。当背压过高或容量显著降低时，需要剥离金属离子，并按照以下程序对树脂充电：

1.用5个树脂床体积的去离子水洗涤树脂；

2.100mM EDTA（pH 8.0），5个树脂床体积；

3.用10个树脂床体积的去离子水洗涤树脂；

4.用5个树脂床体积的0.5M NaOH洗涤树脂，并停留10-15分钟；

5.用10个树脂床体积的去离子水洗涤树脂；

6.100mM Nitso8324；3-5个树脂床体积；

7.用10个树脂床体积的去离子水洗涤树脂；再生后，培养基可以立即使用，也可以在4°C下储存在含有20%乙醇的PBS中。

His标签蛋白纯化试剂盒化学相容性：